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2016版中国药典液相色谱柱，肝素钠检测柱
2016版中国药典液相色谱柱，肝素钠检测柱
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所属分类：液相色谱柱
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2016版中国药典液相色谱柱，肝素钠检测柱

Glycomix™ SAX离子交换色谱柱专为带多电荷聚糖类化合物的分离而设计。填料基质为窄粒径分布的亲水聚合物颗粒，在聚合物颗粒的亲水表面化学键合强阴离子交换基团——季铵基。

2016版中国药典液相色谱柱，肝素钠检测柱产品概述：

2016版中国药典液相色谱柱，肝素钠检测柱

 Glycomix™ SAX离子交换色谱柱专为带多电荷聚糖类化合物的分离而设计。填料基质为窄粒径分布的亲水聚合物颗粒，在聚合物颗粒的亲水表面化学键合强阴离子交换基团——季铵基。

 

Glycomix™ SAX 技术参数

 

特性

Glycomix™ SAX

官能团

季铵基

表面特性

亲水

pH范围

2 - 12

 4.6×250 mm柱的柱压

0.22 mL/min为10 bar
1 mL/min为38 bar

zui大柱压

~ 1,500 (psi)

盐浓度范围

20 mM - 2.0 M

zui高温度

~ 80 (°C)

流动相兼容性

水相和有机相

应用

肝素，带多电荷聚糖

 

●   均匀*的粒径确保了高分辨率和分离的高效性

●　高批间重现性 

●　宽pH范围(2-12) 

●　从分析级到制备级规模 

●　适于肝素和聚糖的分离和分析

 

2016版中国药典液相色谱柱，肝素钠检测柱

 

高批间重现性

 

    由于严格控制的表面化学和树脂生产工艺，Glycomix树脂具有高批间重现性，使得色谱柱性能非常稳定。在肝素钠的检测中，保留时间的批间分离偏差小于1%，峰面积则小于5%。

 

图1. 三个批次GlycomixTM SAX树脂的高批间重现性 

 

色谱条件

 

Column:

GlycomixTM SAX, 4.6×250mm

phase:

A: 0.04% NaH2PO4, pH 3.0
B: 0.04% NaH2PO4+14% NaClO4, pH 3.0

Flow rate:

0.22 mL/min

Gradient:

20% - 90% B in 60 minutes

Wavelength:

202 nm

Temperature:

25 °C

Injection volume:

10 µL

Pressure:

9.5 bar

Sample:

20 mg/mL 肝素钠
1 mg/mL 硫酸皮肤素 (DS)
1 mg/mL 多硫酸软骨素 (OSCS) in H2O

 

 

 

批间的峰保留时间相对标准偏差

 

Peak Name

Lot A

Lot B

Lot C

RSD%

Chondroitin Sulfate B

12.286

12.300

12.434

0.41%

Heparin

21.71

21.723

21.919

0.44%

OSCS

33.936

33.853

34.114

0.32%

 

  2016版中国药典液相色谱柱，肝素钠检测柱

色谱柱寿命长

 

    先进的表面化学结构和稳定的生产工艺使得GlycomixTM SAX具有长的色谱柱寿命。下图显示了同一色谱柱在重复进样时的分离性能。该柱展现了稳定的分离效率。

 

图2. 重复进样的叠加图 

 

 

色谱条件

 

Column:

GlycomixTM SAX, 4.6×250mm

Guard Column:

GlycomixTM SAX, 4.6×50mm

phase:

A: 0.04% NaH2PO4, pH 3.0
B: 0.04% NaH2PO4+14% NaClO4, pH 3.0

Flow rate:

0.22 mL/min

Gradient:

20% - 90% B in 60 minutes

Wavelength:

202 nm

Temperature:

25 °C

Injection volume:

10 µL

Pressure:

9.5 bar

Sample:

20 mg/mL肝素钠
1 mg/mL 硫酸皮肤素 (DS)
1 mg/mL多硫酸软骨素 (OSCS) in H2O

 

 

 

不同上样量下的灵敏分离

 

    GlycomixTM SAX能够从标准品中分离出其他组分。在图3中，图A是20 mg/mL Heparin、1mg/mL DS和1 mg/mL OSCS的标准品色谱图，图B是浓度为1 mg/mL的OSCS色谱图。两图相对比可知,DS和肝素钠之间的小峰来自OSCS标准样品。色谱条件同图4。

    GlycomixTM SAX可用于肝素钠及其杂质的定量分析。图4为不同上样量下的分离谱图，其中肝素钠浓度从0.5 mg/ml到10 mg/ml，OSCS的浓度从0.125 mg/ml到4 mg/ml，DS的浓度从0.25 mg/ml到4 mg/ml。在测试浓度范围内，相对偏差R2值超过0.99。

 

图3. OSCS标准品和肝素钠掺入DS与OSCS的色谱叠加图

 

 

图4. 不同肝素钠进样的色谱叠加图，其中肝素钠从0.5mg/mL到10mg/mL, DS从0.125 mg/m到4.0 mg/mL，OSCS从0.25 mg/mL到4.0 mg/mL


 

色谱条件

 

Column:

GlycomixTM SAX, 4.6×250mm

Guard Column:

GlycomixTM SAX, 4.6×50mm

phase:

A: 0.04% NaH2PO4, pH 3.0
B: 0.04% NaH2PO4+14% NaClO4, pH 3.0

Flow rate:

0.22 mL/min

Gradient:

20% - 90% B in 60 minutes

Wavelength:

202 nm

Temperature:

25 °C

Injection volume:

10 µL

Pressure:

10 bar

Sample:

20 mg/mL 肝素钠
0.2 mg/mL 硫酸皮肤素(DS)
0.2 mg/mL 多硫酸软骨素 (OSCS)

 

 

图5. 硫酸皮肤素（DS）、肝素钠和多硫酸软骨素（OSCS）的校准曲线

 

 

 

 

色谱柱性能比较

 

    经比较, 在肝素钠的分离上，GlycomixTM SAX优于D品牌的柱子。下图是用GlycomixTM SAX分离肝素钠的色谱图，硫酸皮肤素（DS）和肝素钠之间的分离度为3.8，肝素钠和多硫酸软骨素（OSCS）之间的分离度为5.8。美国药典(USP)对于DS/heparin和OSCS/heparin的分离度分别是1.0和1.5。GlycomixTM SAX的分离性能远远高于USP规定的要求。而D品牌色谱柱对于DS/hepari和heparin/OSCS的分离度分别为1.1和1.8。

 

图6. 肝素钠、硫酸皮肤素和多硫酸软骨素在GlycomixTM SAX上的分离

色谱条件

 

Column:

GlycomixTM SAX, 4.6×250mm

Guard Column:

GlycomixTM SAX, 4.6×50mm

phase:

A: 0.04% NaH2PO4, pH 3.0
B: 0.04% NaH2PO4+14% NaClO4, pH 3.0

Flow rate:

0.22 mL/min

Gradient:

20% - 90% B in 60 minutes

Wavelength:

202 nm

Temperature:

25 °C

Injection volume:

10 µL

Pressure:

10 bar

Sample:

20 mg/mL 肝素钠
0.2 mg/mL 硫酸皮肤素(DS)
0.2 mg/mL 多硫酸软骨素 (OSCS)

 

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